dna鉴定中什么测序技术、芯片技术和SNP分型技术
测序技术、芯片技术和SNP分型技术的关系和区别。
测序技术——对基因上的所有碱基对进行排序,对其他方法无法发现的隐藏碱基对进行排序。
芯片技术——是将基因片段有序固定在玻璃载体上,用荧光标记与被检测人员的DNA片段杂交,扫描结果,提取软件的生物分析手段。
芯片技术和SNP分型技术都是在测序技术的基础上进行的,其优点是通过率高。但由于人工误差多,芯片技术的检测准确率降低,而测序技术由于工作量大,检测时间长,但准确率最高。
No10。
检测DNA测序技术。
在待定序列模板上使用一种DNA聚合酶来延伸结合的引物,直到掺入一种链终止核苷酸。每个序列测量由一套四个单独的反应组成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(DNTP),并与限量不同的双脱氧核苷酸(DDNTP)混合。由于DDNTP缺乏延伸所需的3'-OH基因,延长的寡聚核苷酸在G、A、T或C处有选择地终止,终止点取决于反应中相应的双脱氧。每个DNTPS和DDNTPS的相对浓度都可以调整,这样反应就可以得到一组长几百到几千碱基的链终止产物。它们有共同的起点,但终止在不同的核苷酸上,可以通过高分辨率变性凝胶电泳分离不同大小的片段。凝胶处理后,可以用X光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。
基因的特性由DNA碱基序列决定,DNA序列分析(SEQUENCING)是分子生物学研究的重要手段,也是进一步认识和改造目的基因的基础。通过DNA序列分析,可以了解基因的精细结构,获得其限制性内切酶图谱,分析基因突出和功能的影响,帮助人工合成基因,设计引物,研究肿瘤的分子发病机制。
DNA测序是在高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基础上建立的。目前测序主要有两种技术,一种是SANGER等于1977年提出的双脱氧链末端终止法;另一种是MAXAM和GILBERT同年发明的化学降解法。这两种方法在原理上有很大的不同,但都是根据核苷酸在某个固定点开始,在某个特定的碱基处随机终止,产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE凝胶上电泳,得到DNA序列。化学降解法只需要一种化学试剂,重复性好,易于掌握;双脱氧链末端终止法需要单链模板、特殊寡核苷酸引物和优质DNA聚合酶。随着M13噬菌体载体的发明和应用,合成引物更容易获得,测序技术不断改进,双脱氧链末端终止法得到广泛应用。
检测时,从血液、口腔粘膜或其他细胞样品中提取受试者的DNA,然后用PCR技术定位和复制待检测的基因片段。最后,根据不同的基因突变,通过基因测序、SNP分型、凝胶电泳等方法判断待检测基因的基因类型,从而预测相应疾病的风险或分析体内不同药物的强弱代谢。